Usein kysytyt kysymykset keskipakosuodatinlaitteista

Q1. On välttämätöntä erottaa eri molekyylipainoiset proteiinit, joten kuinka paljon eroa proteiinien molekyylipainojen tulisi tarvita?

V: Kahden proteiinin koon on erotettava vähintään 10 kertaa.

 

Q2. Voi sentrifugoidaAlOvatko suodatinlaitteet steriloituja ja alkalipesun kestäviä?

V: Se voidaan steriloida 75-prosenttisella etanolin vesiliuoksella, ja kalvo kestää 0.1-0,5 N natriumhydroksidialkalipesun.

 

Q3. Miten toimia, jos proteiini saostuu keskittymisen aikana?

V: Jos proteiini väkevöidään liian nopeasti tai liian väkevänä, se voi aiheuttaa proteiinin saostumista, eikä proteiinin lopullinen pitoisuus konsentroinnin jälkeen saa olla liian korkea; Proteiinit, jotka ovat herkkiä konsentraationopeudelle ja joilla on taipumus saostua, ehdotettu parannusmenetelmä:

Pienennä keskipakonopeutta

Käytä ultrasuodatuskalvoa, jolla on korkeampi molekyylipainoraja

Puhalla ja ime väkevöity putki ja sentrifugoi sitten

 

Q4. Mikä on mahdollinen syy, miksikeskipakosuodatinlaitteetei voi sentrifugoida alas?

V: Voit käyttää noin 20-prosenttista etanolin vesiliuosta alkusentrifugoinnissa, jos ultrasuodatusputkea ei voida sentrifugoida, koska ultrasuodatuskalvo on täysin kuiva, kalvon pinta on heikosti hydrofobinen ja virtaus voidaan palauttaa tunkeutumisen jälkeen matalalla pintajännitysliuotin.

 

Q5. Keskipakosuodatinlaitteiden oikeat käyttötavat ja varastointi

V: Keskipakosuodatinlaitteet tulee sentrifugoida puhdistetulla vedellä ennen käyttöä niiden eheyden varmistamiseksi. Jokaisen käytön jälkeen se on säilytettävä märässä tilassa, jotta kalvo ei kuivu.

 

Q6. Kuinka keskipakosuodatinlaitteet poistavat endotoksiinin?

V: Toimittamiamme keskipakosuodatinlaitteita ei ole käsitelty endotoksiineilla, ja koska endotoksiineja esiintyy laajasti luonnossa, endotoksiineja vaativat näytteet voidaan esipuhdistaa 0,5 N natriumhydroksidilla ennen koetta ja pestä sitten RO vettä poistamaan suurimman osan endotoksiinista.

 

Q7. Kun tiivistettyä proteiinia käytetään alavirran analyysiin, havaitaan häiriöitä, mikä on syy?

V: Keskipakosuodatinlaitteet voidaan esipesä puskuriliuoksella tai puhdistetulla vedellä. Jos häiriö esiintyy edelleen, pese 0,1 N natriumhydroksidilla ja pese sitten puhdistetulla vedellä.

 

Q8. It havaitaan, että konsentraatissa ei ole kohdeproteiinia väkevöinnin jälkeen. Mitkä ovat mahdolliset syyt?

V: 1) Proteiinin alkupitoisuus ei saa olla liian pieni, jos pitoisuus on liian alhainen, kalvo ei ehkä pysty pidättämään.

2) Valitse sopiva kalvon huokoskoko. Suodatinputken keskipakopitoisuus kuuluu umpikujasuodatukseen, ja kalvon huokoskoko on yleensä alle 2 kertaa tai suurempi kuin kohdeproteiini.

3) Valitse oikea keskipakonopeus

4) Saostuuko kohdeproteiini

 

Q9. Keskipakosuodatinlaitteiden passivointikäsittely

V: Keskipakosuodatinlaitteiden pinnan passivoiva esikäsittely voi vähentää proteiinin adsorptiohäviötä kalvon pinnalla, useimmissa tapauksissa kolonnin esikäsittely ennen laimennetun proteiiniliuoksen väkevöintiä voi parantaa talteenottoa, koska liuos voi täyttää paljastetun tyhjiä proteiinin adsorptiokohtia kalvolla ja pinnalla, passivointimenetelmänä on esiliottaa kolonni suurella tilavuudella passivointiliuosta yli 1 tunnin ajan, huuhdella kolonni perusteellisesti tislatulla vedellä ja sitten sentrifugoida kolonni kerran tislatulla vedellä. Poistaaksesi kalvolle mahdollisesti jäävän passivointiliuoksen kokonaan, varo, ettet anna kalvon kuivua passivoinnin jälkeen, jos haluat säilyttää sen tulevaa käyttöä varten, sinun on lisättävä steriiliä tislattua vettä kalvon pitämiseksi märkänä. Ota yhteyttä insinöörejämme yleisten passivointiratkaisujen löytämiseksi.

 

Q10. Suodattaako ultrasuodatuskalvo molekyylit hierarkkisesti?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 prosenttia käytettäessä 100 kd:n ultrasuodatuskalvoa, kalvon huokoskokoa pienemmät molekyylit eivät kuitenkaan täysin kulje kalvon läpi vapaasti. 67 kd:n molekyyliretentionopeus on yli 70 prosenttia, ja 43 kd:n proteiini on myös yli 40 prosenttia pois, sekaliuoksen eri komponentit kulkevat kalvon läpi ei niin yksinkertaista ja helppoa kuin yksikomponenttinen liuos. , jos haluat eristää kaksi makromolekyyliä, niiden välisen molekyylipainoeron tulee olla vähintään kahdeksan kertaa.

 

Q11. Kuinka suuret ja pienet molekyylit erotetaan tehokkaasti ultrasuodatuksella?

V: Prosessin tarpeista johtuen makromolekyylien epäpuhtaudet poistetaan tai pienet molekyylit poistetaan makromolekyyleistä, se on normaalia tuotannossa. On erittäin tärkeää valita sopiva kalvon huokoskoko, suodatusmenetelmä ja käyttöolosuhteet. Yleisesti ottaen, jos kalvon MWCO-spesifikaatio valitaan näiden kahden proteiinin väliltä, ​​voidaan saavuttaa suhteellisen ihanteellinen erotus. Jos proteiiniliuos on suhteellisen laimeaa, myös matalapaineinen käyttö auttaa saavuttamaan parempia tuloksia. Valitse tangentiaalinen virtaussuodatus ja suorita useita diasuodatuksia saadaksesi paremman erotusvaikutuksen.