Kissan kolmiarvoisen rokotteen jatkopuhdistusprosessi – Ultrasuodatus

Kissan virusperäinen rinotrakeiitti, kissan kalikivirustauti ja kissan panleukopenia (kissan penikkatauti) ovat kolme suurinta tartuntatautia, jotka uhkaavat kotikissojen terveyttä Kiinassa. Kissan virusrinotrakeiitti on herpesviruksen aiheuttama ja erittäin tarttuva. Kissanpentujen sairastuvuus voi nousta 100 %:iin ja kuolleisuus on 20 %–50 %. Kissan kalikivirusinfektiolle on pääasiassa ominaista suun haavaumat ja hengitystieoireet. Vaikka sen kuolleisuus on suhteellisen alhainen, se voi helposti johtaa krooniseen tulehdukseen ja nivelvaurioihin. Kissan panleukopenialle on ominaista akuutti gastroenteriitti ja jyrkkä valkosolujen määrän lasku; kissanpentujen kuolleisuus on yli 50 %. Siksi kolmenarvoisen inaktivoidun rokotteen kehittäminen voi tarjota paremman suojan kissapopulaatioille.

 

Kissan virusperäinen rinotrakeiittivirus, joka tunnetaan myös nimellä kissan herpesvirus tyyppi 1 (FHV-1), kuuluu Herpesviridae-heimon Alphaherpesvirinae-alaheimoon ja sillä on herpesviruksille tyypillisiä morfologisia ominaisuuksia. Genomi FHV-1 on lineaarista kaksijuosteista DNA:ta, jonka pituus on noin 134 kb, ja virionit ovat halkaisijaltaan noin 150–160 nm.

 

Kissan kalicivirus (FCV) kuuluu Caliciviridae-heimoon kuuluvaan Vesivirus-sukuun. Se on tärkeä kissaeläinten patogeeni ja aiheuttaa pääasiassa ylempien hengitysteiden sairauksia, suun haavaumia ja systeemisiä infektioita. FCV-genomi on positiivinen yksijuosteinen RNA, jonka pituus on noin 7,5–7,7 kb ja virionit ovat halkaisijaltaan noin 35–40 nm.

 

Kissan panleukopeniavirus (FPV) kuuluu Protoparvovirus-sukuun Parvoviridae-heimossa ja sillä on parvoviruksille tyypilliset rakenteelliset ominaisuudet. Sen genomi on lineaarinen yksijuosteinen DNA, jonka pituus on noin 5,1 kb. Viruspartikkeleilla on ikosaedrinen rakenne ja niiden halkaisija on noin 20–24 nm.

 

Seuraavat ovat esimerkkejä Jiuling Technologyn ultrasuodatusontoista kuiduista kissan kolmiarvoisten rokotteiden tuotannossa.

Kissan virusperäinen rinotrakeiittivirus (FHV-1)

Käytimme 260 cm²:n onttokuitua 300 kDa:n MWCO:lla (HES030010030) 300 ml:n kirkastetun kissan viruksen rinotrakeiittiviruksen tiivistämiseen ja diasuodattamiseen. Koko ultrasuodatusprosessin aikana arvioimme viruksen talteenottoa, proteiinin kokonaispoistoa, kalvovirran vähenemistä ja vesivirran palautumista.

Näyte	Tilavuus (ml)	log₁₀ (TCID50/ml)	Viruksen palautuminen (%)	Proteiinin kokonaispitoisuus (ug/ml)	Proteiinin kokonaismäärä (ug)	Proteiinin kokonaispoisto (%)
Syötä	300	7.81	95.47	1604.8	481440	97
Keskitä	30	8.72		348.4	10452
Retentaatti Huuhtele	50	7.74		79.1	3955

Leikkausnopeudella 2 000 s-1 300 ml syöttöä konsentroitiin ja diasuodatettiin 30 ml:ksi, mikä edustaa 10-kertaista pitoisuutta. Suoritettiin 20-kertainen diasuodatus (kaksi puskurin lisäystä), mitä seurasi yksi huuhtelu lisämäärällä 50 ml nestettä. Viruksen talteenotto oli 95,47 % ja kokonaisproteiinin poisto oli 97 %. Teollisen mittakaavan tuotannossa retentaattihuuhtelujen määrää tulee lisätä niin paljon kuin mahdollista letkun kuolleen tilavuuden perusteella. Yleensä kolme huuhtelukertaa riittää täydelliseen palautumiseen.

 

 

Ajanjakso 0 - 25 minuuttia oli väkevöintivaihe ja ajanjakso 25 - 70 minuuttia oli diasuodatusvaihe. Koko ultrasuodatusprosessin ajan TMP oli pienempi tai yhtä suuri kuin 3 psi, kun syöttönopeus pidettiin vakiona. Keskimääräinen prosessivirta oli 28,7 LMH.

	TMP (palkki)	LMH	Vesivirtauksen talteenotto (%)
Ennen käyttöä	1.0	300	96.7
Puhdistuksen jälkeen	1.0	290

Mittasimme onton kuidun vesivirran ennen käyttöä ja käytön jälkeen. Samalla syöttönopeudella, syöttöpaineella ja retentaatin paineella ontto kuitu saavutti 96,7 %:n vesivuon talteenoton.

 

Kissan kalicivirus (FCV)

Käytimme 260 cm² onttokuitua, jossa oli 100 kDa MWCO (HES010010030), konsentroimaan ja diasuodattamaan 300 ml kirkastettua kissan kalikivirussatoa. Koko ultrasuodatusprosessin aikana arvioimme viruksen talteenottoa, proteiinin kokonaispoistoa, kalvovirran vähenemistä ja vesivirran palautumista.

Näyte	Tilavuus (ml)	log₁₀ (TCID50/ml)	Viruksen palautuminen (%)	Proteiinin kokonaispitoisuus (ug/ml)	Proteiinin kokonaismäärä (ug)	Proteiinin kokonaispoisto (%)
Syötä	300	8.9	95.6	2030.2	609060	94.8
Keskitä	37.5	9.71		506.8	19005
Retentaatti Huuhtele	50	8.85		253.3	12665

Leikkausnopeudella 2 000 s-1 300 ml syöttöä konsentroitiin ja diasuodatettiin 37,5 ml:ksi, mikä edustaa 8-kertaista pitoisuutta. Suoritettiin 20-kertainen diasuodatus (kaksi puskurin lisäystä), mitä seurasi yksi huuhtelu lisämäärällä 50 ml nestettä. Viruksen talteenotto oli 95,6 % ja kokonaisproteiinin poisto oli 94,8 %. Teollisen mittakaavan tuotannossa retentaattihuuhtelujen määrää tulee lisätä niin paljon kuin mahdollista letkun kuolleen tilavuuden perusteella. Yleensä kolme huuhtelukertaa riittää täydelliseen palautumiseen.

 

 

Ajanjakso 0 - 35 minuuttia oli väkevöintivaihe ja ajanjakso 35 - 125 minuuttia oli diasuodatusvaihe. Koko ultrasuodatusprosessin ajan TMP oli pienempi tai yhtä suuri kuin 3 psi, kun syöttönopeus pidettiin vakiona. Keskimääräinen prosessivirta oli 18,7 LMH.

	TMP (palkki)	LMH	Vesivirtauksen talteenotto (%)
Ennen käyttöä	1.0	200	95
Puhdistuksen jälkeen	1.0	190

Mittasimme onton kuidun vesivirran ennen käyttöä ja käytön jälkeen. Samalla syöttönopeudella, syöttöpaineella ja retentaatin paineella ontto kuitu saavutti 95 %:n vesivuon talteenoton.

 

Kissan panleukopeniavirus (FPV)

Käytimme 260 cm² onttokuitua 100 kDa MWCO:lla (HES010010030) 300 ml:n kirkastetun kissan panleukopeniaviruksen tiivistämiseen ja diasuodattamiseen. Koko ultrasuodatusprosessin aikana arvioimme viruksen talteenottoa, proteiinin kokonaispoistoa, kalvovirran vähenemistä ja vesivirran palautumista.

Näyte	Tilavuus (ml)	log₁₀ (TCID50/ml)	Viruksen palautuminen (%)	Proteiinin kokonaispitoisuus (ug/ml)	Proteiinin kokonaismäärä (ug)	Proteiinin kokonaispoisto (%)
Syötä	300	6.35	94.9	2127	638100	95.8
Keskitä	37.5	7.17		428.8	16080
Retentaatti Huuhtele	50	6.22		210	10500

Leikkausnopeudella 2 000 s-1 300 ml syöttöä konsentroitiin ja diasuodatettiin 37,5 ml:ksi, mikä edustaa 8-kertaista pitoisuutta. Suoritettiin 20-kertainen diasuodatus (kaksi puskurin lisäystä), mitä seurasi yksi huuhtelu lisämäärällä 50 ml nestettä. Viruksen talteenotto oli 94,9 % ja kokonaisproteiinin poisto oli 95,8 %. Teollisen mittakaavan tuotannossa retentaattihuuhtelujen määrää tulee lisätä niin paljon kuin mahdollista letkun kuolleen tilavuuden perusteella. Yleensä kolme huuhtelukertaa riittää täydelliseen palautumiseen.

 

 

Ajanjakso 0 - 30 minuuttia oli väkevöintivaihe ja ajanjakso 30 - 110 minuuttia oli diasuodatusvaihe. Koko ultrasuodatusprosessin ajan TMP oli pienempi tai yhtä suuri kuin 3 psi, kun syöttönopeus pidettiin vakiona. Keskimääräinen prosessivirta oli 21,2 LMH.

	TMP (palkki)	LMH	Vesivirtauksen talteenotto (%)
Ennen käyttöä	1.0	190	96.3
Puhdistuksen jälkeen	1.0	183

Mittasimme onton kuidun vesivirran ennen käyttöä ja käytön jälkeen. Samalla syöttönopeudella, syöttöpaineella ja retentaatin paineella ontto kuitu saavutti 96,3 %:n vesivuon talteenoton.

Tulokset osoittavat, että Jiuling Technologyn 300/100 kDa ontot kuidut voivat toimia vakaasti ja sopivat tähän sovellukseen. 300/100 kDa ontoilla kuiduilla saavutetut viruksen talteenotto- ja proteiininpoistonopeudet vaihtelevat syöttömateriaalista riippuen. Yleensä viruksen talteenotto voi olla noin 95 %, kun taas proteiinin poisto on tyypillisesti 95 %–97 %.

Jiuling Technology ottaa mielellään vastaan ​​kyselyitä testiyksiköistä ja niihin liittyvistä arvioinneista.

 

Tietoja Jiulingista

Jiuling Technology on erikoistunut biofarmaseuttisiin sovelluksiin, soluviljelyyn, puhdistukseen ja erotukseen tarkoitettujen tuotteiden kehittämiseen ja valmistukseen. Sen tuotteita käytetään suodatus-, testaus-, selkeytys-, puhdistus- ja konsentrointiprosesseissa biofarmaseuttisissa tuotteissa, diagnostiikassa ja teollisuusnesteissä. Tuotevalikoimaan kuuluvat ultrasuodatuskeskipakolaitteet, ultrasuodatus/mikrosuodatuskalvokasetit, virustenpoistosuodattimet, sterilointiluokan suodattimet, tangentiaalivirtaussuodatusjärjestelmät, syvyyssuodatinmoduulit ja ontot kuidut, jotka palvelevat sovelluksia, kuten biofarmaseuttista valmistusta ja soluviljelyä. Kalvojamme ja kalvosuodattimiamme käytetään laajalti konsentroimiseen, uuttamiseen ja erottamiseen esisuodatuksessa, mikrosuodatuksessa, ultrasuodatuksessa ja nanosuodatuksessa. Käytämme useita tuotelinjoja pienimuotoisesta kertakäyttöisestä laboratoriosuodatuksesta tuotantomittakaavaan suodatusjärjestelmiin, steriiliystestaukseen, fermentointiin ja soluviljelyyn, jotka vastaavat monenlaisiin prosessikehitys- ja valmistustarpeisiin. Jiuling Technology odottaa innolla yhteistyötä kanssasi.