CM:n heikko ioni-vaihtokalvokromatografia

SP Strong Cation Exchange Membrane Chromatography Product Johdanto 

 

2. Tuotteen edut

Nopea ja tehokas Korkea sitoutumiskapasiteetti voidaan saavuttaa jopa 40 kertaa nopeammilla virtausnopeuksilla kuin perinteinen hartsikromatografia. Perinteiseen hartsi-pohjaiseen kromatografiaan verrattuna kalvokromatografiaa käytettäessä prosessiaikaa voidaan lyhentää 30–40 kertaa. Tyypillinen käyttövirtausnopeus on noin 10 MV/min.

2.2 Korkea sitoutumisteho Membraanikromatografialla on suuri sitoutumiskapasiteetti ja suuret virtausnopeudet pienellä painehäviöllä, mikä mahdollistaa varautuneiden biomolekyylien sieppaamisen yhdellä läpikäynnillä moduulin läpi.

2.3 Skaalautuva ja joustava Täysi valikoima kalvokromatografiatuotteita voi vastata erilaisiin biomolekyylien puhdistuksen tarpeisiin kattaen sovellukset prosessikehityksestä laajamittaiseen tuotantoon. Kapselin rakenne mahdollistaa kertakäyttöisen käytön tai se voidaan puhdistaa ja käyttää uudelleen asianmukaisten puhdistustoimenpiteiden jälkeen.

2.4 Parempi tuottavuus Kompakti muotoilu minimoi laitoksen jalanjäljen. Poistamalla toiminnot, kuten kolonnin pakkaaminen, puhdistus, puhdistuksen validointi ja kolonnin varastointi, käsittely voidaan aloittaa yksinkertaisen tasapainotuksen jälkeen suhteellisen pienemmällä puskurilla. Koska kolonnin pakkausta, puhdistusta tai varastointia ei tarvita, työvoimakustannuksia voidaan vähentää yli 50 %.

 

 

3 Tekniset parametrit

3.1 Rakennemateriaalit

	Laboratorio-asteikko	pieni mittakaava	pilottiasteikko	tuotannon mittakaavassa
kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Kalvon tukirakenne	Polypropeeni
kalvokotelo	Polypropeeni
O rengas	Silikoni

3.2 Käyttöominaisuudet

	Laboratorio-asteikko	pieni mittakaava	pilottiasteikko	tuotannon mittakaavassa
kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Suositeltu virtausnopeus	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimi käyttölämpötila	35 astetta
Suurin käyttöpaine	3 bar (25 astetta)
Suurin paine-ero	3 bar (25 astetta)
Varastointiolosuhteet	20% etanolaqueoussratkaisu

Vertailu osoittaa, että SP-kalvokromatografian käyttöikä on verrattavissa SP Sepharose 6FF:n käyttöikään.

Kuva 1. SP-kalvokromatografian sitoutumiskapasiteetin muutokset lysotsyymillä testattujen useiden käyttökertojen jälkeen

Lisäksi arvioimme kalvokromatografian tehokkuutta isäntäsolun proteiinien ja nukleiinihappojen poistamisessa. Tulokset ovat seuraavat:

	DNA				HCP
	IgG:n palautuminen	Sisältö (pg/mg IgG:tä) RT PCR:llä		Poistotekijä	Sisältö (ng/mg IgG:tä) Elisalta		Poistotekijä
Juokse	%	Ennen Q-kalvoa	Q-kalvon jälkeen	Loki	Ennen Q-kalvoa	Q-kalvon jälkeen	Loki
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

Taulukko 1. DNA:n ja isäntäsoluproteiinin poistumisnopeudet CHO-ekspressoidussa IgG-materiaalissa SP-kalvokromatografiaa käyttäen

Sarja kokeita osoitti, että SP-kalvokromatografia voi tehokkaasti poistaa kontaminantit säilyttäen samalla tavoite-IgG:n korkean talteenottonopeuden.

Kun verrataan Gudiling SP -kalvokromatografiaa maahantuotuihin tuotemerkkeihin, sitomiskapasiteettitiedot ovat seuraavat:

Sidontackapasiteetti (mg/ml)	Sartorius	PALL	Ohjaus
Lysotsyymi	25	32	29
Trypsiini	22	27	25

Taulukko 2. Tuotteemme ja kilpailevien tuotemerkkien eri proteiinien sitoutumiskyky

Kokonaisarvio osoittaa, että sidontakapasiteettimme on verrattavissa tuontituotteisiin.

Kuva 2. SP-kalvokromatografiamoduulin sitoutumiskapasiteettitesti käyttäen lysotsyymiä vakiona

Verrattuna dynaamiseen sitoutumiskykyyn ja tuontituotteisiin, vahvistettiin, että useimmat kohdeproteiinit voidaan siepata, kun lysotsyymi eluoidaan 190 mM NaCl:ssa.

Erilaisten eluointiolosuhteiden kautta havaitsimme, että membraanikromatografian eluutioprofiilit ovat samanlaiset kuin agaroosigeelin, mutta proteiinien puhtaus vaihtelee merkittävästi eri suolapitoisuuksilla. Varsinaisessa T&K-toiminnassa ja tuotannossa on välttämätöntä määrittää kvantitatiivisesti optimaaliset eluointiolosuhteet korkean -puhtauden kohdeproteiinien saamiseksi.

 

4 Tyypillisiä käyttötapauksia

DNA:n, virusten ja isäntäsoluproteiinien poistaminen

Plasmidien, virusten, proteiinien sieppaus ja oligonukleotidien puhdistus

Pigmenttien poistaminen hiivan käymisliemestä ja suuren{0}}kapasiteetin proteiinin talteenotto

 

5 Käyttöohjeet

5.1 Laitteiden valmistelu ja kokoonpano:

5.1.1: Asenna kalvokromatografiamoduuli ÄKTA-kromatografiajärjestelmään noudattamalla hartsikolonneja vastaavia toimenpiteitä ja varmistamalla, että virtaussuunta on kohdakkain moduulin nuolien ja sisääntulon suunnan kanssa. Liitä moduuli joko Luer-lukoilla tai puristin-tyylisillä liittimillä varmistaaksesi integroinnin järjestelmään.

5.1.2 Aseta syöttövirtaus arvoon5-10 MV/minja kaasuttele moduuli käyttämällä tasapainotuspuskuria varmistaen, että jätevesi on vapaa ilmakupista. Kun kaasut on poistettu, yhdistä permeaatin ulostulo kromatografiajärjestelmään.

5.2: Käyttöä edeltävä-hoito:

5.2.1:

Aseta syöttövirtaus arvoon5-10 MV/minja suorita esihoito{0}}0,5 M NaOH yli 5 MVvarmistaen, että kalvo saavuttaa täyden tasapainon.

5.2.2: Suorita samalla virtausnopeudella esikäsittely-1 M NaCl yli 5 MVvarmistaakseen, että kalvo saavuttaa täyden tasapainon.

5.3 Kromatografiaprosessi

5.3.1 Aseta syöttövirtaus arvoon 5–10 MV/min ja tasapainota kalvo tasapainotuspuskurilla yli 5 MV, kunnes kalvo saavuttaa täyden tasapainon.

5.3.2 0,22 μm:n esi-esisuodatuksen jälkeen lataa näyte kalvolle, kunnes näytteen lataus on valmis tai kromatografinen sitoutumiskapasiteetti saavutetaan.

5.3.3 Pese tasapainotuspuskurilla yli 10 MV, kunnes UV-signaali palaa perusviivalle.

5.3.4 Käytä gradienttieluointia tai vaiheittaista eluointia prosessisuunnitelman mukaisesti ja kerää fraktioita tarpeen mukaan.

5.4 CIP Post-Käytä hoitoa – kalvokromatografialaite CIP (puhdistus paikallaan)

5.4.1 Aseta syöttövirtaus arvoon 5–10 MV/min ja suorita puhdistus 1 M NaOH:lla yli 10 MV, kunnes UV-signaali laskee perusviivan alapuolelle.

5.4.2 30 minuutin kierrätyksen jälkeen vaihda vesipesuun, kunnes pH saavuttaa 7–8, ja jatka sitten puhdistusta 20 % etanolilla, kunnes johtavuus on lähes vakio.

5.5 Membraanikromatografiavarastointi

Käytön ja CIP:n valmistumisen jälkeen kalvomoduuli voidaan poistaa ja säilyttää liottamalla se 20 % etanolissa, tai se voidaan säilyttää linjassa huoneenlämmössä 20 % etanolia sisältävässä liuoksessa. 20 % etanoliliuos tulee tarkastaa ja vaihtaa säännöllisesti.

 

6. Tilaustiedot

Q Vahva anioninvaihtokalvokromatografiakapselisuodatin

	Laboratorio-asteikko	pieni mittakaava	pilottiasteikko	tuotannon mittakaavassa
Tuotteen malli	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Suositut Tagit: cm heikko ioni-vaihtokalvokromatografia, Kiina, toimittajat, valmistajat, tehdas, tukkumyynti, irtotavarana, varastossa, ilmainen näyte