DEAE:n heikko anioninvaihtokalvokromatografia

DEAE Weak Anion Exchange Membrane Chromatography – tuotteen esittely

 

1. Yleiskatsaus

DEAE-heikkoanioninvaihtokromatografia on puhdistustekniikka, joka perustuu erilaisten biomolekyylien varausominaisuuksien ja varaustiheyden eroihin. Koska useimmat biomakromolekyylit sisältävät funktionaalisia ryhmiä, kuten karboksyyli- tai hydroksyyliryhmiä, niiden varausominaisuuksia ja suuruutta voidaan säätää muuttamalla puskuriliuoksen pH:ta. Kun biomolekyylit sitoutuvat vastakkaisesti varautuneeseen anionin tai kationinvaihtoväliaineeseen, erotus saavutetaan muuttamalla liikkuvan faasin ionivahvuutta tai pH:ta. Molekyylit, joilla on heikompi sitoutumisaffiniteetti, eluoidaan ensin ja sitten ne, joilla on vahvempi sitoutumisaffiniteetti, jolloin saadaan aikaan tehokas erottelu

 

2. Tuotteen edut

2.1 Korkea tehokkuus: Saavuttaa vahvan sitoutumisen virtausnopeuksilla, jotka ovat jopa 40 kertaa suuremmat kuin hartsi-pohjaisella kromatografialla. Perinteiseen pakattuun -kerroskromatografiaan verrattuna kalvokromatografia lyhentää prosessin kokonaisaikaa noin 30–40 kertaa.

2.2 Korkea sitoutumistehokkuus: Kalvokromatografialla on korkea sitoutumiskapasiteetti ja suuri virtausnopeus alhaisessa painehäviössä, mikä mahdollistaa varautuneiden biomolekyylien sieppaamisen yhdellä siirrolla kolonnin läpi.

2.3 Skaalautuva ja joustava: Täysi sarja kalvokromatografiatuotteita voi vastata erilaisiin biomakromolekyylien puhdistustarpeisiin ja kattaa kaikki vaiheet prosessin kehittämisestä laajamittaiseen tuotantoon. Kapseli-tyyppinen rakennerakenne tukee sekä kertakäyttöistä-käyttöä että uudelleenkäyttöä puhdistuksen jälkeen.

2.4 Parempi tuottavuus: Kompakti muotoilu minimoi laitoksen jalanjäljen. Poistamalla kolonnin pakkaamisen, puhdistuksen, puhdistuksen validoinnin ja kolonnin varastointitoimenpiteet, järjestelmää voidaan käyttää välittömästi puskurin tasapainotuksen jälkeen ilman kolonnin pakkaamista tai varastointia. Työvoimakustannuksia voidaan alentaa jopa 50 prosenttia.

 

3. Tekniset parametrit

3.1 Rakennemateriaalit

	laboratoriomittakaavassa	pieni mittakaava	pilottiasteikko	tuotannon mittakaavassa
Kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Kalvon tukirakenne	Polypropeeni (PP)
Kalvokotelo	Polypropeeni (PP)
O rengas	Silikoni

3.2 Käyttöominaisuudet

	laboratoriomittakaavassa	pieni mittakaava	pilottiasteikko	Tuotannon mittakaava
Kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Suositeltu virtausnopeus	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimi käyttölämpötila	35 astetta
Suurin käyttöpaine	3 bar (25 astetta)
Suurin paine-ero	3 bar (25 astetta)
Varastointiolosuhteet	20 % 乙醇水溶液 20 % etanolin vesiliuos

Kuva 1. Muutokset kalvokromatografian kuormituskapasiteetissa useiden käyttökertojen jälkeen, joita seurataan BSA:lla.

Lisäksi arvioimme isäntäsoluproteiinien ja nukleiinihappojen poistotehokkuutta käyttämällä DEAE-kalvokromatografiaa. Tulokset ovat seuraavat.

	DNA				HCP
	IgG:n palautuminen	Sisältö (pg/mg IgG:tä) RT PCR:llä		Poistotekijä	Sisältö (ng/mg IgG:tä) Elisalta		Poistotekijä
Juokse	%	Ennen DEAE-kalvoa	DEAE-kalvon jälkeen	Loki	Ennen DEAE-kalvoa	DEAE-kalvon jälkeen	Loki
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Taulukko 1. DNA:n ja isäntäsoluproteiinien poistumisnopeudet CHO--ilmentyneestä IgG:stä käyttämällä DEAE-kalvokromatografiaa.

Sarja kokeita osoitti, että Q-membraanikromatografia voi tehokkaasti poistaa epäpuhtaudet säilyttäen samalla kohde-IgG:n korkean talteenottonopeuden.

Lisäksi verrasimme Gudilingin kalvokromatografiaa maahantuotuihin merkkeihin, ja latauskapasiteettitiedot ovat seuraavat.

Kuva 2. Eri proteiinien latausteho membraanikromatografiaan ja kilpailijoiden tuotteisiin

Kokonaisarvio osoittaa, että lastauskapasiteettimme on verrattavissa tuontituotteisiin.

Kuva 3. DEAE-kalvokromatografiamoduulin suorituskyky kollageeniproteiinitestauksessa

DEAE-kalvokromatografiamoduulia käyttämällä validointitulokset osoittivat, että useimmat kohdekollageeniproteiineista voitiin siepata ja eluoida käyttämällä 135 mM NaCl:a.

Testaamalla erilaisissa eluointiolosuhteissa havaitsimme, että membraanikromatografialla ja agaroosigeelikromatografialla on samanlainen eluointikäyttäytyminen, jossa proteiinin puhtaus vaihtelee merkittävästi eri suolapitoisuuksilla. Käytännön T&K:ssa ja tuotannossa on välttämätöntä määrittää kvantitatiivisesti optimaaliset tasapainoeluutio-olosuhteet korkean -puhtauden kohdeproteiinien saamiseksi.

 

4. Klassiset sovellustapaukset

DNA:n, virusten, isäntäsoluproteiinien ja endotoksiinien poistaminen

Plasmidien, virusten, nukleiinihappojen ja proteiinien sieppaus sekä oligonukleotidien puhdistus

 

5. Käyttötyönkulku

5.1: Laitteiden valmistelu ja kokoonpano

5.1.1 Kalvokromatografiamoduuli tulee asentaa AKTA-kromatografiajärjestelmään samalla tavalla kuin pakatut hartsikolonnit varmistaen, että virtaussuunta on linjassa nuolien ja sisääntulon suunnan kanssa. Liitä Luer-liittimillä tai puristusliittimillä.

5.1.2 Aseta tulovirtaus arvoon 5–10 MV/min ja käytä tasapainotuspuskuria ilman puhdistamiseen. Jatka huuhtelua, kunnes kuplia ei havaita ulostulossa, ja yhdistä sitten permeaatin ulostulo kromatografiajärjestelmään

5.2:Ennen käyttöä-hoitoa

5.2.1: Aseta sisääntulon virtausnopeudeksi 5–10 MV/min ja suorita esikäsittely 0,5 M NaOH:lla yli 5 MV:n ajan varmistaaksesi, että kalvo saavuttaa tasapainon.

5.2.2: Samalla virtausnopeudella esikäsittele edelleen tasapainotuspuskurilla (1 × PBS) yli 5 MV varmistaaksesi, että kalvo saavuttaa tasapainon.

5.3 Kromatografiaprosessi

5.3.1

Aseta tulovirtaus 5–10 MV/min ja esikäsittele tasapainotuspuskurilla yli 5 MV, kunnes kalvo saavuttaa tasapainon.

5.3.2

Kun näyte on esisuodatettu-0,22 μm:n suodattimen läpi, lataa näytettä, kunnes lataus on valmis tai kromatografian latauskapasiteetti saavutetaan.

5.3.3

Pese tasapainotuspuskurilla yli 10 MV, kunnes UV-absorbanssi laskee perusviivalle.

5.3.4

Käytä gradienttieluointia tai lineaarieluointia prosessisuunnitelman mukaisesti ja kerää näytteitä tarvittaessa fraktioina.

5.4, ​​CIP:n jälkeinen-käyttökäsittely – kalvokromatografialaitteen CIP

5.4.1

Aseta sisääntulon virtausnopeudeksi 5–10 MV/min ja suorita puhdistus-paikan päällä (CIP) 0,5 M NaOH:lla yli 10 MV:n ajan, kunnes UV-absorbanssi laskee perusviivan alapuolelle.

5.4.2

30 minuutin kiertopesun jälkeen vaihda vesipesuun, kunnes pH on välillä 7–8, ja jatka sitten puhdistusta 20 % etanolilla, kunnes johtavuus pysyy lähes vakiona.

5.5, Kalvokromatografiavarasto:

Käytön ja CIP:n valmistumisen jälkeen kalvomoduuli voidaan irrottaa ja säilyttää liottamalla 20 % etanolissa tai säilyttää verkossa huoneenlämmössä 20 % etanoliliuoksessa. 20 % etanoliliuos tulee tarkastaa ja vaihtaa säännöllisesti.

 

6.Tilaustiedot

DEAE-tyyppinen heikko anioninvaihtokalvokromatografiakapselisuodatin

	Laboratorio-asteikko	pieni mittakaava	Pilottiasteikko	Tuotannon mittakaava
Tuotteen malli	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Suositut Tagit: deae heikko anioninvaihtokalvokromatografia, Kiina, toimittajat, valmistajat, tehdas, tukkumyynti, irtotavarana, varastossa, ilmainen näyte