SP Strong Cation Exchange Membrane Chromatography

CM Weak Ion{0}}Cchange Membrane -kromatografiatuotteiden esittely

 

1. Yleiskatsaus

CM-heikkokationin-vaihtokromatografia on puhdistustekniikka, jossa karboksimetyyliryhmät sitoutuvat kalvoon toiminnallisen moduulin muodostamiseksi. Erotus tapahtuu erilaisten biomolekyylien varausominaisuuksien ja varaustiheyksien erojen perusteella. Koska useimmat biologiset makromolekyylit sisältävät karboksyyli- tai hydroksyyliryhmiä, niiden varausominaisuuksia ja suuruutta voidaan säätää muuttamalla puskuriliuoksen pH-arvoa. Kun biomolekyylit sitoutuvat vastakkaisia ​​varauksia kantavaan kalvomoduuliin, eluointi suoritetaan muuttamalla liikkuvan faasin ionivahvuutta tai pH:ta. Molekyylit, joilla on heikompi sitoutumisaffiniteetti, eluoidaan ensin, kun taas ne, joilla on vahvempi sitoutumisaffiniteetti, eluoidaan myöhemmin, jolloin saavutetaan tehokas erotus.

 

2. Tuotteen edut

2.1 Nopea ja tehokas: Suuri sitoutumiskapasiteetti voidaan saavuttaa jopa 40 kertaa nopeammilla virtausnopeuksilla kuin perinteinen hartsi{2}}pohjainen kromatografia. Perinteiseen täytekerroskromatografiaan verrattuna kalvokromatografia voi lyhentää prosessiaikaa 30–40 kertaa. Tyypillinen käyttövirtausnopeus on 10 MV/min.

2.2 Korkea sitoutumistehokkuus: Kalvokromatografia osoittaa korkean kuormituskapasiteetin ja suuret virtausnopeudet alhaisen painehäviön olosuhteissa, mikä mahdollistaa varautuneiden biomolekyylien sieppaamisen yhdellä ajolla moduulin läpi.

2.3 Skaalautuva ja joustava: Täydellinen valikoima kalvokromatografiatuotteita voi vastata erilaisiin biomakromolekyylien prosessointitarpeisiin, jotka kattavat vaiheet prosessin kehittämisestä laajamittaiseen valmistukseen. Kapselin rakenne mahdollistaa kertakäyttöiset sovellukset tai se voidaan puhdistaa ja käyttää uudelleen tarpeen mukaan.

2.4 Lisääntynyt tuottavuus: Kompakti muotoilu minimoi laitoksen jalanjäljen. Eliminoimalla kolonnin pakkaus-, puhdistus-, puhdistuksen validointi- ja kolonnin varastointivaiheet, käsittely voidaan aloittaa tasapainotuksen jälkeen suhteellisen pienellä puskuritilavuudella. Koska kolonnin pakkausta, puhdistusta tai varastointia ei tarvita, työvoimakustannuksia voidaan vähentää jopa yli 50 %.

 

3 Tekniset parametrit

3.1 Rakennemateriaalit

	Laboratoriovaaka	pieni mittakaava	Pilottiasteikko	Tuotannon mittakaava
Kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Kalvon tukirakenne	Polypropeeni
Kalvokotelo	Polypropeeni
O rengas	Silikoni kumi

3.2 Käyttöominaisuudet

	Laboratoriovaaka	pieni- mittakaava	Pilot- mittakaava	Tuotannon mittakaava
Kalvon tilavuus	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Suositeltu virtausnopeus	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimi käyttölämpötila	35 astetta
Suurin käyttöpaine	3 bar (25 astetta)
Suurin paine-ero	3 bar (25 astetta)
Varastointiolosuhteet	20 % etanolin vesiliuos

Perinteisiin väliaineisiin verrattuna CM-kalvokromatografian käyttöikä on verrattavissa CM-agaroosigeelin 6FF käyttöikään.

Kuva 1. Muutokset CM-membraanikromatografian latauskapasiteetissa useiden lysotsyymitestien käyttöjen jälkeen.

Lisäksi arvioimme isäntäsolun proteiinien ja nukleiinihappojen poistotehokkuutta kalvokromatografialla. Tulokset on esitetty alla.

Taulukko 1. DNA:n ja isäntäsoluproteiinien poistumisnopeudet CHO--ilmentyneestä IgG-materiaalista käyttämällä CM-kalvokromatografiaa

Sarja kokeita osoitti, että CM-kalvokromatografia voi tehokkaasti poistaa epäpuhtaudet säilyttäen samalla tavoite-IgG:n korkean talteenottonopeuden.

	DNA				HCP
	IgG:n palautuminen	Sisältö (pg/mg IgG:tä) RT PCR:llä		Poistotekijä	Sisältö (ng/mg IgG:tä) Elisalta		Poistotekijä
Juokse	%	Ennen Q-kalvoa	Q-kalvon jälkeen	Loki	Ennen Q-kalvoa	Q-kalvon jälkeen	Loki
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Kun käytetään Gudiling CM -kalvokromatografiaa muihin merkkeihin verrattuna, latauskapasiteettitiedot on esitetty alla.

Latauskapasiteetti (mg/ml)	Jingbiao 1	Ohjaus
Lysotsyymi	18	23
Trypsiini	17	20

Taulukko 2. Eri proteiinien latausteho tuotteessamme verrattuna kilpailijoiden tuotteisiin

Kokonaisarviointi osoittaa, että lastauskapasiteettimme on verrattavissa tuontituotteisiin.

Kuva 2. CM-kalvokromatografiamoduulin latauskapasiteettitesti käyttämällä lysotsyymiä standardiproteiinina.

Dynaamista lastauskapasiteettia verrattiin myös tuontituotteiden vastaavaan. Varmentaminen osoitti, että lysotsyymi voitiin eluoida käyttämällä 160 mM NaCl:a, mikä mahdollistaa useimpien kohdeproteiinien tehokkaan sieppaamisen.

Optimoimalla erilaisia ​​eluointiolosuhteita havaitsimme, että membraanikromatografialla on samanlainen eluointikäyttäytyminen kuin agaroosigeelikromatografiassa, jossa proteiinien puhtaus vaihtelee merkittävästi eri suolapitoisuuksilla. Käytännön T&K:ssa ja tuotannossa on välttämätöntä määrittää kvantitatiivisesti tasapainoeluutio-olosuhteet korkean -puhtauden kohdeproteiinin saamiseksi.

 

4. Tyypilliset sovellustapaukset

• DNA:n, virusten ja isäntäsoluproteiinien poistaminen
• Plasmidien, virusten ja proteiinien sieppaus sekä oligonukleotidien puhdistus
• Hiivan käymisliemen värinpoisto ja suuren{0}}kapasiteetin proteiinin talteenotto

 

5. Käyttömenettely / Työnkulku

5.1: Laitteiden valmistelu ja kokoonpano:

5.1.1: Asenna kalvokromatografiamoduuli AKTA-kromatografiajärjestelmään Asennusmenetelmä on samanlainen kuin pakattu-kerroskromatografiaväliaine; varmista, että virtaussuunta noudattaa moduuliin merkittyä nuolta. Moduuli voidaan liittää Luer-liittimillä tai puristusliittimillä.

5.1.2 Aseta tulovirtaus arvoon 5–10 MV/min ja käytä tasapainotuspuskuria ilman poistamiseen moduulista. Jatka huuhtelua, kunnes kuplia ei havaita ulostulossa, ja yhdistä sitten permeaatin ulostulo kromatografiajärjestelmään.

5.2.: Valmistelu ennen käyttöä-

5.2.1: Aseta tulovirtaus 5–10 MV/min ja suorita esikäsittely käyttämällä 0,5 M NaOH:ta yli 5 MV:n ajan varmistaaksesi, että kalvo saavuttaa tasapainon.

5.2.2: Suorita samoissa virtausnopeusolosuhteissa esikäsittely 1 M NaCl:lla yli 5 MV:lla varmistaaksesi, että kalvo saavuttaa tasapainon.

5.3. Kromatografiaprosessi

5.3.1 Aseta tulovirtaus arvoon 5–10 MV/min ja suorita esikäsittely tasapainotuspuskurilla yli 5 MV, kunnes kalvo saavuttaa tasapainon.

5.3.2 Lataa näyte 0,22 μm:n esi{2}}esisuodatuksen jälkeen pylvääseen ja jatka, kunnes koko näyte on levitetty tai kromatografian latauskapasiteetti on saavutettu.

5.3.3 Pese tasapainotuspuskurilla yli 10 MV, kunnes UV-arvo laskee perusviivalle.

5.3.4 Käytä prosessisuunnitelman mukaan gradienttieluointia tai lineaarista eluointijärjestelmää ja kerää fraktioita segmenteissä tarpeen mukaan.

5.4 CIP:n jälkeinen-käyttökäsittely – CIP (Clean-in-Place) kalvokromatografiajärjestelmälle.

5.4.1 Aseta tulovirtaus arvoon 5–10 MV/min ja käsittele 1 M NaOH:lla yli 10 MV, kunnes UV-arvo laskee perusviivan alapuolelle.

5.4.2 30 minuutin kiertopesun jälkeen huuhtele vedellä, kunnes pH on välillä 7-8, vaihda sitten 20 % etanoliin ja jatka puhdistusta, kunnes johtavuus pysyy lähes muuttumattomana.

5.5 Kalvokromatografiavarasto

Käytön ja CIP:n valmistumisen jälkeen kalvomoduuli voidaan irrottaa ja säilyttää liottamalla 20 % etanolissa tai säilyttää verkossa huoneenlämmössä 20 % etanolia sisältävässä liuoksessa. 20 % etanoliliuos tulee tarkastaa ja vaihtaa säännöllisesti.

 

6, Tilaustiedot

CM--tyyppinen heikko kationinvaihtokalvokromatografiakapselisuodatin

	Laboratoriovaaka	Pieni mittakaava	Pilottiasteikko	Tuotannon mittakaava
Malli	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Kalvoalue	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Suositut Tagit: sp vahva kationinvaihtokalvokromatografia, Kiina, toimittajat, valmistajat, tehdas, tukkumyynti, irtotavarana, varastossa, ilmainen näyte