Tehokas ja edullinen prosessi hiivaa ilmentävien rekombinanttiproteiinien kirkastukseen ja ultrasuodatukseen
Eksogeenisten geenien hiivaekspressio ei voi tuottaa ainoastaan rekombinanttiproteiineja ja -peptidejä, vasta-aineita ja rokotteita, sytokiinejä, kasvutekijöitä, hormoneja ja muita bioaktiivisia aineita, vaan sitä voidaan käyttää myös teollisten entsyymien, terveysvaikutteisten elintarvikkeiden ja biologisten materiaalien tuottamiseen, jolla on laajat sovellusmahdollisuudet .
Hiivan ilmentämisjärjestelmä sisältää kaksi yleisesti käytettyä ekspressiojärjestelmää, toisin sanoen saccharomyces cerevisiae -ilmentämisjärjestelmän ja metanotrofisen hiivan ilmentämisjärjestelmän. Metanolihiivan ilmentämisjärjestelmä on tällä hetkellä laajimmin käytetty hiivan ilmentämisjärjestelmä, ja Pichia on yleisimmin käytetty, joka voi käyttää metanolia hiilenä ja energiana. Lisäksi on Hansenin hiiva, Sphaeroides ja niin edelleen.
Riippumatta siitä, millainen hiivan ilmentämisjärjestelmä on, sen alavirran erotus- ja puhdistusprosessit ovat samanlaisia, ja spesifinen prosessivirta ottaa esimerkkinä rekombinanttiproteiinien ja polypeptidilääkkeiden ilmentymisen hiivassa.
Ohjaavat mikrosuodatuskalvokasetit käyttävät avoimen virtauskanavan ja tangentiaalivirtauksen suodatusmoodia, jotka voivat tehokkaasti käsitellä monimutkaisia syöttönesteitä, kuten hiivan fermentointinestettä ja E. coli -krakkausnestettä suurella nopeudella, ja voivat varmistaa lineaarisen vahvistuksen pienestä testistä tuotantomittakaavaan. Kompakti modulaarinen rakenne, yksinkertainen putkiliitäntä, järjestelmän riippumattomuus ja luettavuus voivat suojata käyttäjiä ja estää biologista saastumista. Eikä huolto- ja puhdistustarkastusta. Siksi se sopii erittäin hyvin varhaisen jatkokäsittelyn selkeytysvaiheeseen.
UF/DF-prosessin päätarkoitus on poistaa epäpuhtaudet ja syrjäyttää puskurit. Ohjaavalla ultrasuodatuskalvokasetilla on hyvä kalvon huokoskoon homogeenisuus ja vahva hydrofiilisyys, mikä voi antaa kalvolle suuremman virtauksen ja alhaisemman proteiiniadsorption sekä optimoidun virtauskanavan suunnittelun pienemmällä painehäviöllä, helpolla materiaalin siirrolla ja lyhentää merkittävästi suodatusaikaa. Lisäksi tuotesarja on täydellinen ja joustava vastaamaan eri mittakaavaisten eri sovellusten tarpeita. Siksi se sopii erittäin hyvin jatkokäsittelyn UF/DF-vaiheeseen.
Seuraava on Guidling-kalvon käyttötapakasettirekombinanttiproteiinien ilmentymisessä hiivassa.
Mikrosuodatuskirkastus
Käytimme {{0}},11 neliömetrin 0,22 μm:n huokoskalvokasettia 1,5 litran hiivan käymisnesteen (tavoiteproteiinimolekyylipaino 42-55 KD) kirkastukseen mikrosuodatuksella. Koko mikrosuodatusprosessin aikana tutkittiin kohdeproteiinin talteenottonopeutta, sameuden muutosta ja kalvovirran ehtymistä.
0-17min on tiivistysprosessi, 17-32min on pesu- ja suodatusprosessi. Koko mikrosuodatusprosessin aikana TMP kasvoi vähitellen, nesteen sisääntulonopeus pysyi muuttumattomana ja keskimääräinen materiaalivirta oli 45 LMH.
Nesteen sameus oli 600 NTU ennen mikrosuodatusta ja 8 NTU mikrosuodatuksen jälkeen, ja sameus muuttui selvästi.
Tulokset osoittivat, että kohdeproteiinin saanto oli > 90%. Guidling Technology 0,22 μm:n kalvokasetti on vakaa ja sopii tähän sovellukseen.
Ultrasuodatuspitoisuus
1,5 litran kirkastetun nesteen ultrasuodatuskonsentraatio (tavoiteproteiinin molekyylipaino 42-55kd) suoritettiin käyttämällä 0,11 neliömetriä 10 kd:n kalvokasettia. Koko ultrasuodatusprosessissa tutkittiin kohdeproteiinin talteenottonopeutta, kalvovuon ehtymistä ja vesivirtauksen talteenottonopeutta.
Ennen käyttöä ja käytön jälkeen kalvon palautumisaste voi olla 90%.
0-15min on konsentraatioprosessi, 15-18min on nesteenvaihtoprosessi. Koko ultrasuodatusprosessin aikana TMP nousi asteittain, nesteen sisääntulonopeus pysyi muuttumattomana ja keskimääräinen materiaalivirta oli 50 LMH.
Tulokset osoittivat, että kohdeproteiini oli täysin loukussa. Guidling Technology 10 kd:n kalvokasetit voivat toimia vakaasti ja sopivat tähän sovellukseen.
Suurin osa hiivan ekspressoimista rekombinanttiproteiineista ei ilmentynyt voimakkaasti. Suodatetun nesteen sameus väheni selvästi ja proteiinin talteenottonopeus oli suurempi. Koska seuraava kromatografinen aika on liian pitkä, se aiheuttaa haitallisia vaikutuksia proteiiniin, kromatografisen näytteenottoajan lyhentämiseksi voidaan lisätä yksi ultrasuodatuskonsentraatiovaihe ja kohdeproteiini voidaan konsentroida nopeasti näytteen jälkeen, mikä voi saavuttaa tavoite säästää aikaa, vähentää täyteaineen määrää ja siten vähentää tuotantokustannuksia.
Guidling Technologyn mikrosuodatuskalvokasetit voivat yleensä vähentää syöttönesteen sameutta alle 20 NTU:iin, mikä täyttää täysin myöhemmän ultrasuodatuksen ja kromatografian tarpeet. Ultrasuodatuskalvokasettien ultrasuodatuksen talteenottonopeus vaihtelee eri materiaalien mukaan, yleinen talteenottoaste voi olla 90-95%.
Guidling Technology toivottaa sinut tervetulleeksi pyytämään testisarjoja asiaan liittyvää arviointia varten.
Tietoja Guidlingistä
Guidling Technology on valtakunnallinen korkean teknologian yritys, joka keskittyy biofarmaseuttisiin valmisteisiin, soluviljelyyn, biolääketieteen puhdistukseen ja konsentroimiseen, diagnoosiin ja teollisuusnesteisiin. Olemme onnistuneesti kehittäneet keskipakosuodatinlaitteita, ultrasuodatus- ja mikrosuodatuskasetteja, virussuodattimia, TFF-järjestelmiä, syvyyssuodattimia, onttoja kuituja jne., jotka täyttävät täysin biofarmaseuttisten tuotteiden, soluviljelyn ja niin edelleen sovellusskenaariot. Kalvojamme ja kalvosuodattimiamme käytetään laajasti esisuodatuksen, mikrosuodatuksen, ultrasuodatuksen ja nanosuodatuksen tiivistämiseen, uuttamiseen ja erottamiseen. Monet tuotelinjamme pienestä kertakäyttöisestä laboratoriosuodatuksesta tuotannon suodatusjärjestelmiin, steriiliystestaukseen, fermentointiin, soluviljelyyn ja muuhun vastaavat testauksen ja tuotannon tarpeita. Guidling Technology odottaa innolla yhteistyötä kanssasi!